產(chǎn)品名稱(chēng)：2×pSC-T vector Fast Ligation Mix
產(chǎn)品編號(hào)與包裝規(guī)格：
| 編號(hào) | 產(chǎn)品名稱(chēng) | 規(guī)格 | 產(chǎn)品介紹 | 價(jià)格 |
| HKT004-01B | 2×pSC-T vector Fast Ligation Mix | 20次×5 | T載體 | 2398 |
產(chǎn)品描述：
Simple Cloning T-vector 是一種 PCR 產(chǎn)物高效 TA 克隆 的專(zhuān)用 T 載體，它由 pUC18 載體改造而成，去除了 PCR 產(chǎn) 物插入?yún)^(qū)域兩側(cè)所有的酶切位點(diǎn)。PCR 產(chǎn)物克隆后如果使 用其兩端的酶切位點(diǎn)進(jìn)行酶切時(shí)，T載體上不會(huì)有相同的酶 切位點(diǎn)影響酶切反應(yīng)，可以大大提高酶切效率，增加亞克隆 成 功率。多克隆位點(diǎn)的消除并不影響 β-半乳糖苷酶的正常表 達(dá)，PCR 產(chǎn)物克隆后仍可以利用 α-互補(bǔ)性進(jìn)行藍(lán)白斑篩選， 挑選陽(yáng)性克隆。
傳統(tǒng)T 載體在進(jìn)行連接時(shí)的操作程序是：載體、片段、 T4 DNA Ligase Buffer、T4 DNA Ligase。本制品是在傳統(tǒng)模 式上將除了插入片段的各成分進(jìn)行預(yù)混，并使其在穩(wěn)定性、 轉(zhuǎn)化子數(shù)目、陽(yáng)性率方面不低于傳統(tǒng)模式，使用時(shí)只需加入插入片段即可，大大簡(jiǎn)化了操作過(guò)程，降低了配制連接體系 過(guò)程中的誤差和污染率，節(jié)省了時(shí)間。
2×pSC-T vector Fast Ligation Mix 產(chǎn)品包裝（A包裝）：
操作方法：
1） 快速連接反應(yīng)體系：
| 組分 | 體積 |
| 2×pSC-T vector Fast Ligation Mix (10 ng/μL) | 10μL |
| 目的PCR 片段/ Control Insert DNA | X μL/1μL |
| ddH2O | 至 20μL |
反應(yīng)條件：16℃或 25℃下，保溫15至30分鐘。
注：保溫5分鐘也能正常進(jìn)行連接反應(yīng)，但反應(yīng)效率略 為降低。25℃下進(jìn)行連接，其效果略差于16℃下連接效果。 而更高的溫度（>26℃）則較難形成環(huán)狀DNA。
2）取10μL加入至100μL感受態(tài)細(xì)胞中，用移液槍吹打 混合，冰上放置30分鐘。
3）將離心管置于42℃水浴中，熱擊60-90秒，迅速將離 心管置于冰上，放置2-3分鐘。
4）向每個(gè)離心管中加入500μL無(wú)菌不含抗生素的LB 或SOC培養(yǎng)基中，37℃搖床，150rpm振蕩培養(yǎng)45分鐘，使 質(zhì)粒上氨芐抗性基因表達(dá)，菌體復(fù)蘇。
5）吸取 200μL 已轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細(xì)胞，加到含氨芐青霉素的 LB 或 SOC 固體平板上，用無(wú)菌涂布棒將細(xì)胞均勻涂開(kāi)，將平板置于 37℃培 養(yǎng)箱里直至液體完全吸收，倒置培養(yǎng) 12-16 小時(shí)。
6） PCR 檢測(cè)，利用試劑盒自帶的高速PCR 擴(kuò)增試劑 2×FastTaq Mast Mix 直接進(jìn)行菌落PCR 鑒定。
